Volume 1, Nomor 11, November 2021

p-ISSN 2774-7018 ; e-ISSN 2774-700X

1444 http://sosains.greenvest.co.id

OPTIMALISASI WAKTU INKUBASI DAN KONSENTRASI PEPSIN

PADA AKTIVITAS PRODUKSI SERUM ANTI TETANUS

M. Ambri Saputra Maelandri dan Rida Emelia

Politeknik Piksi Ganesha Bandung, Indonesia

E-mail: m.ambri[email protected] dan emeliarida1310@gmail.com

Diterima:

23 Oktober 2021

Direvisi:

10 November

2021

Disetujui:

15 November

2021

Abstrak

Tetanus merupakan penyakit yang disebabkan oleh kuman

Clostridium tetani. Penyakit ini termasuk mematikan di negara

berkembang. Melihat masih tingginya kasus tetanus di negara

berkembang serta untuk memberikan pelayanan terbaik dan

pengobatan efektif terhadap pasien yang terkena penyakit tetanus,

maka diperlukan optimalisasi pada proses pembuatan serum anti

tetanus, sehingga dapat meningkatkan kapasitas produksi dan

kualitas serum yang dihasilkan. Berdasarkan latar belakang

tersebut, penelitian ini bertujuan untuk mengetahui optimalisasi

waktu inkubasi dan konsentrasi pepsin pada aktivitas produksi

serum anti tetanus. Penelitian ini merupakan penelitian deskriptif

kuantitatif dengan teknik pengumpulan data melalui observasi

dan studi pustaka. Berdasarkan hasil analisis menggunakan

software khusus densitometri Design of Experiment (DoE)

dengan metode Sodium Dodecyl Sulphate Polyacrylamide Gel

Elektroforesis (SDS PAGE) bahwa konsentrasi optimum

didapatkan pada sampel anti tetanus ke-7 dengan konsentrasi

pepsin sebesar 0,18 % dalam waktu inkubasi 5 jam.

Kata kunci: Inkubasi, pepsin, SDS Page, tetanus

Abstract

Tetanus is a disease caused by the bacterium Clostridium tetani.

This disease is one of the deadliest in developing countries. Seeing

the high number of tetanus cases in developing countries and to

provide the best service and effective treatment for patients

affected by tetanus, it is necessary to optimize the process of

making anti tetanus serum, so as to increase the production

capacity and quality of the serum produced. Based on this

background, this study aims to determine the optimization of

incubation time and pepsin concentration on anti tetanus serum

production activity. This research is quantitative descriptive

research with data collection techniques through observation and

literature study. Based on the results of the analysis using a

special densitometry software Design of Experiment (DoE) with

the Sodium Dodecyl Sulphate Polyacrylamide Gel

Electrophoresis (SDS PAGE) method that the optimum

concentration was obtained in the 7th anti tetanus sample with a

pepsin concentration of 0.18% in an incubation time of 5 hours.

Keywords: incubation, pepsin, SDS Page, tetanus

Profil Penggunaan Obat Tradisional di Apotek Sumber

Waras

2021

M. Ambri Saputra Maelandri dan Rida Emelia 1445

Pendahuluan

Tetanus adalah penyakit yang disebabkan oleh kuman Clostridium tetani, dengan

gejala utama spasme otot tanpa gangguan kesadaran, disebabkan oleh tetanospasmin yaitu

eksotoksin yang dihasilkan oleh Clostridium tetani (Leman & Tumbelaka, 2016). Menurut

Harum, spora Clostridium tetani biasanya masuk ke dalam tubuh melalui luka pada kulit

disebabkan terpotong, tertusuk, luka bakar, gigi berlubang, atau infeksi pada tali pusat yang

biasa dikenal sebagai tetanus neonatorum (Harum, 2014). Saat terinfeksi, toksin ini akan

dibawa menuju terminal syaraf sehingga menurunkan fungsi sel saraf motorik yang

bertanggung jawab mengaktifkan otot secara sadar. Gambaran klinis tetanus diawali

dengan kejang otot di sekitar luka, lemah, cemas, gelisah, mudah tersinggung dan sakit

kepala, kemudian kaku pada rahang, perut dan punggung yang mengeras serta kesukaran

untuk menelan (Ade, 2016).

Penyebaran penyakit tetanus menyebar di seluruh dunia terutama di negara

berkembang dengan frekuensi penderita yang bervariasi. Penyakit ini termasuk mematikan

di negara berkembang karena telah membunuh kurang lebih 500.000 orang pertahun

(Rahmanto & Farhanah, 2017). Menurut WHO penyebab kematian yang diakibatkan

tetanus neonatorum TN di negara-negara berkembang adalah sebanyak 135 kali lebih

tinggi dari pada negara maju. Pada tahun 2007, 2011, dan 2014 diantara jumlah kasus TN

di negara-negara ASEAN, Indonesia menempati urutan kedua setelah Philipina, yaitu

dengan jumlah penderita lebih dari 100 orang. Disamping itu, tingkat kasus kematian yang

diakibatkan penyakit TN di Indonesia cenderung mengalami kondisi yang cukup tinggi di

tahun 2014 (Yani & Munawaroh, 2020). Angka kematian (case fatality rate) Tetanus

neonatorum dari tahun 2007-2011 berada di kisaran angka 48%-61%. Pada tahun 2013

case Fatality Rate tetanus neonatorum sebesar 49,6%. Terdapat sebanyak 84 kasus TN

yang terjadi di Indonesia pada tahun 2014 dengan kematian mencapai 54 orang atau 64,3%

(Sari, 2017).

Penyakit tetanus pernah meningkat di Indonesia saat terjadi tsunami di provinsi

Nanggroe Aceh Darussalam pada 26 Desember 2004 silam. Pasien tetanus mencapai 106

kasus dalam kurun waktu yang sangat singkat. Penyebab kematian dilaporkan karena

adanya manifestasi klinik peneumonia, dan sarana prasarana kesehatan yang rusak dan

hilang selama kurun waktu yang singkat (Prawira, Witari, & Tini, 2018). Hal ini

menunjukkan bahwa tetanus dapat terjadi kapan saja, termasuk ketika bencana alam

melanda. Penyakit ini menjadi ancaman bagi orang-orang yang berpotensi terinfeksi

Clostridium tetani, terutama yang tidak menerima vaksin tetanus. Infeksi dapat terjadi

akibat tingkat kebersihan yang masih sangat kurang, perawatan luka yang kurang

diperhatikan, mudah terjadi kontaminasi, serta kurangnya kesadaran masyarakat terhadap

pentingnya kebersihan dan kekebalan terhadap tetanus.

Volume 1, Nomor 11, November 2021

p-ISSN 2774-7018 ; e-ISSN 2774-700X

1446 http://sosains.greenvest.co.id

Menurut Leman & Tumbelaka, (2010) bahwa Secara klinis tetanus dibagi menjadi 4

derajat, yaitu derajat I (ringan), derajat II (sedang), derajat III (berat), dan derajat IV

(stadium terminal). Pengobatan infeksi penyakit ini dapat dilaksanakan dengan pemberian

antibiotik, menetralkan toksin, pemberian obat antikonvulsan dan memberikan perawatan

pada luka. Saat ini Indonesia telah memiliki beberapa pilihan untuk netralisasi toxin tetanus

yaitu Anti Tetanus Serum (ATS) yang dihasilkan oleh plasma kuda (equine) atau Human

Tetanus Immunoglobulin (HTIG) yang berasal dari plasma darah manusia. Penggunaan

serum merupakan bentuk imunisasi pasif yang diberikan dengan cara menginjeksikan

antibodi dalam tubuh sebagai pengobatan atau langkah preventif terhadap infeksi tetanus

(Murwani, 2015).

Serum anti tetanus diproduksi dengan cara imunisasi aktif. Hewan donor diimunisasi

dengan toksin yang telah dilemahkan, kemudian akan memicu dihasilkannya antibodi pada

serum darah yang digunakan untuk melawan toksin yang sebelumnya telah diinjeksikan.

Kuda merupakan donor yang sering digunakan karena kapasitas volume darahnya besar,

sekitar 8% dari berat tubuh. Kuda memiliki kadar imunoglobulin G yang paling tinggi

sehingga cocok sebagai hewan donor untuk tujuan penggunaan protein plasma sebagai

pengobatan teurapetik (Bertolini, J, Goss, N, Curling, 2013).

Serum merupakan produk farmasi yang tergolong sebagai sediaan steril. Sediaan

steril adalah sediaan yang bebas dari cemaran mikroba patogen atau non patogen, mikroba

vegetatif atau non vegetatif. Serum anti tetanus berfungsi untuk menetralkan toksin yang

diproduksi oleh kuman tetanus, penggunaan serum anti tetanus secara terus-menerus

dianjurkan bagi orang yang mudah terserang tetanus dari luka, seperti orang dengan sejarah

imunisasi yang tidak lengkap atau status imunisasinya tidak jelas (Sitti Fatmayani Marhaes

& Zaenab, 2018). Rute pemberian serum adalah melalui parenteral yang artinya

disuntikkan langsung pada membrane kulit atau mukosa, sehingga sediaan ini harus bebas

dari kontaminasi mikroba dan toksin serta memiliki kemurnian yang tinggi. Oleh karena

itu seluruh bahan, proses yang terlibat langsung dengan produksi sediaan ini harus dapat

menjamin sterilitas, dan keamanan.

Proses digestasi enzim pepsin (pepsin asi) merupakan metode untuk memisahkan

fragmen F(ab)2 dari molekul antibodi (Satria Nugraha, 2020). Melalui proses ini didapat

(Fab’)2 yang merupakan bagian yang spesifik mengikat antigen sehingga dapat

menetralkan racun yang masuk ke dalam tubuh. Melihat masih tingginya kasus tetanus di

negara berkembang serta untuk memberikan pelayanan terbaik dan pengobatan efektif

terhadap pasien yang terkena penyakit tetanus, maka diperlukan optimalisasi pada proses

pembuatan serum anti-tetanus sehingga dapat meningkatkan kapasitas produksi dan

kualitas serum yang dihasilkan. Oleh karena itu penelitian ini bertujuan untuk mengetahui

optimalisasi waktu inkubasi dan konsentrasi pepsin pada aktivitas produksi serum anti

tetanus.

Metode Penelitian

Desain Penelitian

Penelitian ini merupakan penelitian deskriptif kuantitatif dengan teknik

pengumpulan data melalui observasi dan studi pustaka. Hasil penelitian merupakan

deskripsi dari data kuantitatif pada desain penelitian eksperimental yang diperoleh selama

observasi. Observasi penelitian dilakukan di Laboratorium QC PT. Bio Farma (Persero)

Profil Penggunaan Obat Tradisional di Apotek Sumber

Waras

2021

M. Ambri Saputra Maelandri dan Rida Emelia 1447

yang beralamat di Jl. Pasteur No. 28, Pasteur, Kec. Sukajadi, Kota Bandung, Jawa Barat

40161. Penelitian dilakukan selama 2 bulan, yaitu dari bulan April sampai Juni 2021.

Penelitian ini meliputi desain penelitian, bahan penelitian, alat penelitian, jalannya

penelitian, dan analisis data. Analisis data menggunakan software khusus densitometri

pada Design of Experiment (DoE) dengan metode Sodium Dodecyl Sulphate

Polyacrylamide Gel Elektroforesis (SDS PAGE).

Bahan Penelitian

Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah plasma kuda anti tetanus, water

for injection, stacking buffer, bis acrylamide 30%, resolving buffer, SDS 10 %, TEMED,

larutan coomassie blue, larutan destaining (asam asetat), APS, tip kuning dan putih, dan

microtube.

Alat Penelitian

Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah satu set SDS Page, waterbath, pH

meter, timbangan elektrik, beaker glass, gelas ukur, syringe 30 mL, syringe filter 0,22 µm,

termometer, kulkas suhu 2-8° C, magnetic stirrer, magnetic bar, pipet tetes, tabung falcon

45 mL, stopwatch, vortex, termomixer, gel scanner, densitometry software program, spatel

logam, mikropipet (0,1 µL, 10 µL, 2 mL), poolbox, dan nanodrop spektrofotometer.

Jalannya Penelitian

Pembuatan design of experiment

Pembuatan desain eksperimen meliputi proses yang telah diuji menggunakan tujuh

sampel. Berikut hasil konsentrasi pepsin pada sampel anti tetanus.

Tabel 1. Hasil konsentrasi pepsin pada sampel anti tetanus

Sampel

Waktu

Konsentrasi Pepsin

ATS 1

1 jam

0,12 % (g/ml)

ATS 2

5 jam

0,12 %

ATS 3

3 jam

0,15 %

ATS 4

3 jam

0,15 %

ATS 5

3 jam

0,15 %

ATS 6

1 jam

0,18 %

ATS 7

5 jam

0,18 %

Preparasi sampel plasma

Plasma Kuda anti tetanus dari batch yang sama diencerkan dengan WFI dengan

perbandingan 1:2, disiapkan gelas beaker 1000 mL dan diisi 40 mL sampel plasma anti

tetanus dan diencerkan dengan 80mL WFI. Kemudian pH sampel disesuaikan dengan pH

optimum pepsin asi yang sudah ditentukan yaitu 3,2 dengan menambahkan larutan HCl

dan dihomogenkan dengan menggunakan magnetic stirrer.

Preparasi pepsinasi

Proses pepsinasi dilakukan di waterbath dengan suhu inkubasi 37ºC dengan waktu

inkubasi dan konsentrasi pepsin disesuaikan Design of Experiment (DOE). Sampel plasma

dimasukkan waterbath hingga suhu sampel mencapai 37ºC, kemudian pepsin Bovine

ditimbang dan dimasukkan pada sampel. Setelah proses inkubasi selesai, sampel di filter

dengan menggunakan syringe filter 0,22 µm. Proses pepsinasi dihentikan dengan

menaikkan pH sampel menjadi 6,5 dengan NaHCO3.

Volume 1, Nomor 11, November 2021

p-ISSN 2774-7018 ; e-ISSN 2774-700X

1448 http://sosains.greenvest.co.id

Pengukuran konsentrasi

Sampel plasma hasil pepsinasi ditentukan konsentrasinya dengan menggunakan

Nanodrop Spectrofotometer. Instrumen dinyalakan kemudian dipilih menu protein UV,

kemudian dipilih menu Igg Human untuk membaca sampel plasma. Blanko yang

digunakan adalah WFI. Sebanyak 2µL sampel diukur dengan Nanodrop Spectrofotometer.

Konsentrasi yang didapat digunakan untuk menyeragamkan konten yang akan dimasukkan

dalam sumur gel SDS Page.

Preparasi gel sds page

Gel dibuat dengan menggunakan bahan poliakrilamid. Gel SDS- PAGE dibuat 2

jenis gel yaitu resolving gel dan stacking gel. Resolving gel adalah gel yang berada dibawah

dan memiliki pori yang lebih kecil, berfungsi untuk memisahkan protein berdasarkan berat

molekulnya. Sedangkan stacking gel adalah gel yang berada di atas mempunyai pori yang

lebih besar yang berfungsi untuk meratakan dan menyamakan posisi sampel agar dapat

bermigrasi secara bersamaan. Gel dibuat dengan menggunakan kaca khusus yang

berukuran pendek dan panjang, dan menggunakan cetakan sisir untuk membentuk sumur

pada stacking gel yang nantinya akan menjadi tempat meletakkan sampel. Gel yang telah

dibuat sebelum digunakan dapat disimpan di dalam buffer running yang mengandung

Tris/glycine/SDS.

Tabel 2. Komposisi gel SDS Page

Resolving gel

Stacking gel

WFI

1700 µL

WFI

975 µL

Bis Acrylamide

2000 µL

Bis Acrylamide

268 µL

Resolving buffer

1250 µL

Resolving buffer

415 µL

SDS 10 %

50 µL

SDS 10 %

50 µL

APS (Ammonium

Persulfat )

70 µL

APS (Ammonium

Persulfat )

20 µL

TEMED

10 µL

TEMED

3,5 µL

Preparasi sampel SDS Page

Sampel plasma hasil pepsinasi yang telah diukur konsentrasinya dengan

menggunakan Nanodrop Spectrofotometer ditentukan volume yang akan dimasukkan pada

sumur gel SDS Page dengan menyamakan konten. Dengan perhitungan yaitu Konten (µg)

= Konsentrasi x Volume Sampel (µL). Kemudian siapkan microtube untuk masing-masing

sampel. SDS- PAGE yang digunakan pada percobaan ini adalah SDS-PAGE Non-

Reducing yaitu tidak menggunakan mercaptoethanol. Sampel dimasukkan pada microtube

kemudian ditambahkan buffer sampel sebanyak 2 x volume sampel, kemudian

ditambahkan WFI sebagai pelarutnya, dengan volume total setiap sampel 10 µL, dengan

konten 20 µg. Sampel kemudian divortex selama 7 detik menggunakan mini spin dan

dipanaskan menggunakan thermo mixer dengan suhu 70ºC selama 10 menit. Kemudian

sampel terlebih dahulu dimasukkan ke dalam mini spin untuk memastikan tidak ada sampel

yang masih menempel di dinding microtube.

Running sds page

Set alat SDS Page disiapkan yang terdiri dari chamber, buffer DAM, buffer running,

sumber tegangan, gel yang telah dibuat dan sampel. Gel dipasang pada chamber kemudian

Profil Penggunaan Obat Tradisional di Apotek Sumber

Waras

2021

M. Ambri Saputra Maelandri dan Rida Emelia 1449

chamber diisi dengan menggunakan buffer running hingga merendam seluruh gel. Bagian

sumur berada diatas. Kemudian dimasukkan ladder atau marker protein sebagai tanda

sebanyak 3 µL. Sampel dimasukkan pada sumur dengan menggunakan mikropipet

sebanyak 10 µg. Setelah selesai chamber ditutup dan dialiri arus listrik dari anoda ke

katoda. tegangan yang digunakan 100 V dengan waktu 110 menit.

Staining and gel

Gel kemudian diangkat dari chamber dan dilepaskan dari kaca untuk dipotong pada

bagian sumur. Kemudian gel dicuci dengan WFI dan direndam dalam larutan staining yang

berisi coomassie blue selama 1 jam dengan bantuan roller mixer agar proses pewarnaan

merata. Kemudian gel didistaining selama 2 jam dengan bantuan roller mixer.

Analisis Data

Gel yang sudah diwarnai kemudian di scan dengan menggunakan UV Scanner.

Kemudian hasil scan dianalisis menggunakan software khusus densitometri untuk melihat

ukuran pita-pita protein setelah dilakukan proses pepsinasi.

Pengujian Titer Plasma

Pengujian nilai titer plasma berfungsi untuk mengetahui kadar potensi dari suatu

antibodi. Pengujian titer dilakukan dengan prinsip pembentukan flokulan (metode

flokulasi) dengan mereaksikan antigen dengan antibodi. Antibodi direaksikan dengan

antigen (toksoid tetanus) dalam NaCl 0,85 % fisiologis. Kemudian reaksi dipercepat

dengan bantuan panas. Penghitungan nilai titer antibodi menggunakan satuan Lf (Limit of

Flocculation) yang menyatakan jumlah toksoid yang direaksikan dengan 1 IU

(International standard Antitoxin). Waktu yang diperlukan untuk terbentuk flokulan

pertama (Kf) menunjukan indikator pada kualitas antigen dan antibodi (Coombs, Rigsby,

Sesardic, & Stickings, 2016).

Hasil dan Pembahasan

Proses pembuatan fragmen poliklonal antibodi untuk tujuan pengobatan dilakukan

melalui beberapa step design dalam perkembangannya untuk meningkatkan efektifitas dan

mengurangi efek samping dari produk antibodi. Proses pembuatan serum anti tetanus yang

berasal dari kuda dilakukan dengan mengimunisasi hewan donor dengan racun yang telah

dilemahkan secara berulang dan terjadwal, hingga mendapatkan potensi atau titer yang

tinggi untuk diproduksi sebagai serum. Hewan donor kemudian diambil darahnya dan

dipisahkan plasma dengan sel-sel darah yang lain.

Pepsin merupakan protease yang dapat memotong antibodi menjadi fragmen-

fragmennya. Dalam memproduksi serum anti tetanus atau anti venom yang lain fragmen

yang dituju adalah (Fab’) yang merupakan bagian yang spesifik mengikat antigen sehingga

dapat menetralkan racun yang masuk kedalam tubuh. Fragmen crystallizable (Fc)

merupakan fragmen yang berfungsi sebagai situs pengenalan sel-sel efektor yang spesifik

(Mentari, 2018). Dilaporkan bahwa keberadaan Fc dan protein agregat dapat menimbulkan

efek samping dalam penggunaan serum yang berasal dari kuda (equine). Pepsin dapat

memotong antibody menjadi fragmen (Fab’)2 dan Fc dengan cara memutus secara spesifik

ikatan amida dengan terminal N dari asam amino aromatic seperti (fenilalanin, tirosin dan

triptofan sehingga residu asam amino hasil hidrolisis dengan pepsin diharapkan memiliki

berat molekul yang lebih kecil (Hermanto. S., Sumarlin. L.O., Fatimah. W., 2013).

Volume 1, Nomor 11, November 2021

p-ISSN 2774-7018 ; e-ISSN 2774-700X

1450 http://sosains.greenvest.co.id

Percobaan ini dilakukan dengan memvariasikan konsentrasi pepsin yang digunakan

dan waktu inkubasi plasma. Respon yang diamati adalah luasan area (Fab’)2 dengan

menggunakan SDS PAGE dan Densitometri serta respon titer plasma dengan

menggunakan uji flokulasi. Pepsin yang digunakan adalah pepsin Bovine, plasma diatur

pH 3,2 dengan penambahan HCl dan suhu inkubasi 37ºC. Proses pepsinasi dihentikan

dengan menaikkan pH menjadi 6,5 meggunakan NaHCO

. Berdasarkan hasil SDS PAGE,

dapat diamati ditiap line terapat pita-pita protein yang diduga merupakan IgG ± 150 kDa,

(Fab’)2 ± 110 kDa dan Fab ± 55 kDa. Berikut gambar gel SDS Page setelah di Scan dan

hasil densitometri selama percobaan di PT Bio Farma:

Gambar 1. Gel SDS Page setelah di Scan (Percobaan di PT Bio Farma)

Gambar 2. Hasil densitometri (Percobaan di PT Bio Farma)

Berdasarkan densitomeri, didapatkan luas area (Fab’)2 setiap sampel yaitu:

Profil Penggunaan Obat Tradisional di Apotek Sumber

Waras

2021

M. Ambri Saputra Maelandri dan Rida Emelia 1451

Tabel 3. Luasan (Fab’)2 hasil densitometri

Sampel

Luas (Fab’)

(Pixel)

5.980

5.292

6.298

4.824

6.030

4.992

16786 (Fab) = 13.244

dan (Fab’)2 = 3.542

Berdasarkan analisis titer menggunakan uji flokulasi, diperoleh titer plasma setelah

proses pepsinasi sebagai berikut:

Tabel 4. Hasil uji titer plasma ATS

Sampel

Titer (LF)

Sebelum

240

260

220

5000

Berdasarkan tabel di atas, pada A7 sampel plasma dengan konsentrasi pepsin 0,18

% dan inkubasi selama 5 jam diperoleh nilai titer yang sangat tinggi. Analisis menggunakan

design of experiment dilakukan dengan menggunakan software mode. Faktor yang

dimasukkan adalah konsentrasi pepsin dan waktu inkubasi. Sedangkan respon yang hendak

diamati yaitu luasan area (Fab’)2 dan nilai titer plasma. Kemudian dapat dilihat interpretasi

hasil analisis design of experiment.

Gambar 3. Area Fab’2 dan titer plasma pasca pepsinasi (PT Bio Farma)

Volume 1, Nomor 11, November 2021

p-ISSN 2774-7018 ; e-ISSN 2774-700X

1452 http://sosains.greenvest.co.id

Dari grafik diatas diperoleh hasil area merah merupakan hasil pepsinasi optimum

yang diperoleh, dapat diamati bahwa A7 menggambarkan respon yang paling optimum

namun dengan luas (Fab’2) yang sebetulnya kecil. Luasan area yang diduga Fab

memberikan gambaran linear dengan hasil titer yang didapatkan. Dugaan penulis

konsentrasi pepsin 0,18 % dengan waktu inkubasi 5 jam menyebabkan (Fab’)2 terpotong

lagi menjadi Fab dengan berat molekul ± 55 kDa. Hal itu kemungkinan dapat terjadi saat

pepsin memotong ikatan disulfida yang menghubungkan antar Fab. Fab merupakan

antibody binding site dengan dengan satu sisi perlekatan antigen (monovalen). Fragmen

(Fab’)2 karena memiliki berat molekul yang lebih besar, penggunaannya pun akan lebih

efektif dilihat dari prinsip toxin serta farmakokinetik dan farmakodinamik, waktu paruh

dari (Fab’)2 lebih lama. Penggunaan Fab dalam netralisasi suatu toxin memiliki

karakteristik yaitu cepat dieliminasikan oleh tubuh karena memiliki berat molekul yang

lebih rendah, Fab akan sangat efektif dalam menetralkan toxin atau neurotoxin dengan

berat molekul rendah yang akan cepat di distribusi dan cepat dieliminasikan dari tubuh,

seperti racun kalajengking dan laba-laba (World Health Organization, 2017).

Kesimpulan

Proses Pepsinasi dilakukan dengan mengoptimalkan pH di 3,2 dan suhu inkubasi

37ºC, kemudian diberi pepsin sebagai enzim protease, kemudian dihentikan aktivitas enzim

dengan menaikkan pH menjadi 6,5 menggunakan NaHCO

kemudian dianalisis hasil

pepsinasi dengan menghitung titer ATS dan analisis area (Fab’)2 dengan menggunakan

SDS PAGE. Konsentrasi optimum didapatkan pada sampel Anti Tetanus ke 7 dengan

konsentrasi pepsin sebesar 0,18 % dengan waktu inkubasi 5 jam.

Bibliografi.

Ade, Siam Wulandari. (2016). Laporan Tugas Akhir Asuhan Kebidanan Komprehensif

Pada Ny.” A” G2p1001 Dengan Anemia Ringan Wilayah Kerja Puskesmas Graha

Indah Balikpapan.

Bertolini, J, Goss, N, Curling, J. (2013). Production of Plasma Proteins for Therapeutic

Use. In Proteomics (Vol. 13). https://doi.org/10.1002/pmic.201370099

Coombes, Laura, Rigsby, Peter, Sesardic, Dorothea, & Stickings, Paul. (2016).

Collaborative study for the calibration of a replacement International Standard for

diphtheria toxoid for use in flocculation test. Biologicals, 44(6), 556–566.

https://doi.org/10.1016/j.biologicals.2016.07.005

Harum, Aroma. (2014). Dental Caries as a Risk Factor of Tetanus. Jurnal Medula, 3(02),

Hermanto. S., sumarlin. L.O., Fatimah. W. (2013). Differentiation of Bovine and Porcine

Gelatin Based on Spectroscopic and Electrophoretic Analysis. Analytical Chemistry,

24(12), 1949–1952. https://doi.org/10.1021/ac60072a021

Leman, Martinus M., & Tumbelaka, Alan R. (2016). Penggunaan Anti Tetanus Serum dan

Human Tetanus Immunoglobulin pada Tetanus Anak. Sari Pediatri, 12(4), 283–288.

Mentari, Anoraga Mona Larasati Sekar. (2018). Engaruh Cheral Terhadap Kuantitas

Relatif Sel Natural Killer, Tnf-Α Dan Ifn-Γ Pada Mencit (Mus Musculus) Model

Kanker Payudara. Malang: Universitas Brawijaya.

Murwani, Sri. (2015). Dasar-dasar Mikrobiologi veteriner. Malang: Universitas Brawijaya

Press.

Prawira, Tu Bagus Adnan Angga, Witari, Ni Putu, & Tini, Kumara. (2018). Faktor–faktor

yang berhubungan dengan luaran klinis pasien tetanus di RSUP Sanglah pada bulan

Profil Penggunaan Obat Tradisional di Apotek Sumber

Waras

2021

M. Ambri Saputra Maelandri dan Rida Emelia 1453

Januari 2018–Oktober 2019. Metode, 2019.

Rahmanto, Danawan, & Farhanah, Nur. (2017). Faktor-Faktor Risiko yang Berpengaruh

pada Kematian Pasien Tetanus di RSUP Dr. Kariadi Semarang. Faculty of Medicine.

Sari, Selvy Novita. (2017). Risk Analyses Factor of Infant Mortality Caused by Tetanus

Neonatorum in East Java. Jurnal Berkala Epidemiologi, 5(2), 231–239.

Satria Nugraha, Reza. (2020). Optimalisasi Proses Digestasi Enzim Pepsin pada Serum

Anti Difteri Menggunakan SDS PAGE.

Sitti Fatmayani Marhaes, Penulis, & Zaenab, Sitti. (2018). Pengaruh Pemberian Imunisasi

Dpt Terhadap Perubahan Suhu Tubuh Pada Bayi Usia 3–12 Bulan Di Puskesmas

Poasiakota Kendari Provinsi Sulawesi Tenggara Tahun 2018. Sulawesi Tenggara:

Poltekkes Kemenkes Kendari.

World Health Organization. (2017). Guidelines for the production, (Vol. 148).

Yani, Wine Frindi, & Munawaroh, Madinah. (2020). Sikap Ibu, Dukungan Suami dan

Peran Tenaga Kesehatan Berhubungan dengan Pelaksanaan Imunisasi TT Ibu Hamil.

Jurnal Ilmiah Kebidanan Indonesia, 10(02), 34–41.

This work is licensed under a Creative Commons Attribution-

ShareAlike 4.0 International License.